TrypLUS

TrypLUS 酶用途

用于贴壁培养细胞消化

1. 原代细胞的获取，用于组织块的消化解离

2. 用于贴壁细胞的传代消化

3. 用于微载体方法培养的细胞消化

贮藏条件及效期

储存条件：4℃避光保存，24 个月稳定

TrypLUS 酶简介

TrypLUS （EC:3.4.21.4）是一种来源于 Fusarium oxysporum 的胰蛋白酶样蛋白酶，该酶是从大肠杆菌中表达纯化而来。该酶与胰蛋白酶的酶切位点和 pH 活性范围一致，能对蛋白序列中精氨酸和赖氨酸的羧基端进行切割。

TrypLUS 酶在细胞实验中已被证明可以有效地解离贴壁生长哺乳动物细胞系，具有与猪胰蛋白酶相似的解离动力学，并表现出较低的细胞毒性。细胞复制、增殖动力学和长期维持可与动物胰蛋白酶收获的细胞一致。纯度分析表明，TrypLUS 酶相较于传统胰蛋白酶，纯度更高，分子更加稳定，活性保持更加优异。

图 1 . TrypLUS 3D 结构图

TrypLUS 酶产品信息

表 1. TrypLUS 酶放行检测项目及结果

项目	描述
序列来源	Fusarium oxysporum
外观	透明
分子量	22.2 kDa
纯度（尺寸排阻色谱）	≥95%
比活*	≥27,000 U/mg
细菌内毒素	＜5 EU/ml
宿主蛋白残留	＜10 PPM
最适 pH	7.0-7.4
储存温度	2-8℃

* 酶活性单位定义：25℃，pH 7.6，反应体系 3.2 mL (1cm 光路)，每分钟酶解 BAEE（N-Benzoyl-L-Arginine-Ethyl ester）

使 253nm 波长吸收值增加 0.003 定义为一个活力单位（Unit/mg protein）（2020 版《中国药典》）

文本框: 21.256

25.799

29.453

31.171

32.659

35.618 0.14

0.12

0.10

0.08

0.06

0.04

0.02

0.00

0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00 46.00 48.00 50.00 52.00 54.00 56.00 58.00 60.00

分钟

图 2. SEC-HPLC 酶纯度检测（纯度为 99.28%）

贴壁细胞消化使用说明

1. TrypLUS 可在室温条件下使用，也可在使用前预热至 37℃以达到较好的消化效果

2. 操作步骤（T25 瓶为例，T75 瓶 TrypLUS 消化液建议添加量为 5 ml）

2.1 T25 培养的细胞达到 90%以上融合后进行消化传代。

2.2 去掉细胞培养基，加入 10mL PBS 洗一次。

2.3 每瓶加入 1.7mL 的 TrypLUS 酶，放置 37℃消化 3min。

2.4 使用 8.3mL 完全培养基重悬细胞，并使用移液器轻轻吹散细胞。

2.5 使用细胞计数仪检测细胞数和活率。

2.6 将 1 ×106 个细胞传代到 T25 培养瓶中。

2.7 传代 24h 后观察细胞贴壁情况。注：消化后无需使用胰酶抑制剂

实验流程：